SECUENCIACIÓN DEL EXOMA

SECUENCIACIÓN DEL EXOMA PARA IDENTIFICAR NUEVOS MARCADORES EN LA DM2

Las Tecnologías de secuenciación de próxima generación (NGS).

Se ha demostrado que la secuenciación del exoma permite identificar hasta un 42% de las causas de enfermedades monogénicas y oligogénicas La secuenciación del exoma de grandes cohortes ha proporcionado información importante sobre el papel de las variantes de codificación raras en la DT2 y la obesidad. Así se han logrado identificar varios marcadores comunes y específicos, es decir genes RREB1, ITGB6, COL2A1, TMC8 y ADAMTS13. Así como marcadores candidatos que se ha demostrado que están significativamente asociados con el fenotipo en uno de los estudios de mapeo fino más recientes (por ejemplo, rs328 en LPL , rsrs62618693 en QSER, y rs9379084 en RREB1).

Whole exome sequencing (2).

BIBLIOGRAFÍA

1. Identificación de nuevos marcadores candidatos de diabetes tipo 2 y obesidad en Rusia mediante la secuenciación del exoma con un tamaño de muestra limitado. NCBI. 2018. [accessed 26 May 2019] Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6115942/
2. Whole Exome Sequencing. 2017. [accessed 26 May 2019] Available from: https://www.youtube.com/watch?v=2PkF1-efXcI

PRUEBA DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

PRUEBA DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA DE DMT2

T:Análisis de asociación genética entre el SNP RS914458 del gen proteína tirosina fosfatasa no receptor tipo 1 (ptpn1) y diabetes tipo 2 en población peruana
O:Evaluar la posible asociación entre el SNP rs914458 (C>G) del gen PTPN1con la DM2 en una población de la zona urbana de Lima – Perú.
M:
200µL de linfocitos de sangre periférica, de los cuales 50µL de DNA que fue almacenado a -20º C.
AN:ADN genómico humano extraído mediante el kit de extracción PureLink (Invitrogen).
G:SNP (polimorfismo de un solo nucleótido) rs914458 del gen PTPN1,este polimorfismo rs914458 (C>G) se encuentra localizado a 10 kb downstream del gen PTPN1 que codifica una proteína tirosina fosfatasa 1B (PTP1B).
PCR: Las mezclas se realizaron en un volumen de 20 µL, con buffer PCR 1X, 200 µmol de dNTP, 1.5 mM de MgCl2, 0.25 U AmpliTaq Gold, 40 ng de DNA genómico y 0.5 µL de cada primer. 
Las condiciones de amplificación para el SNP fueron: 95ºC por 2 min, 30 ciclos de 95ºC por 30 s, 64ºC por 30 s y 72ºC por 10 s, y finalmente 72ºC por 10 min.
Los fragmentos amplificados fueron purificados con el kit High Pure PCR cleanup micro.
V:La visualización de cada fragmento se realizó por electroforesis en gel de agarosa al 1.5%. (1)

PCR BUFFER (2)

BIBLIOGRAFÍA:

1. Paredes Anaya M, Solís Villanueva J, Manrique Hurtado H, Calderón Ticona J, Torres Gonzales D, Padilla Rojas C et al. Análisis de asociación genética entre el SNP RS914458 del gen proteína tirosina fosfatasa no receptor tipo 1 (ptpn1) y diabetes tipo 2 en población peruana. 2014;. [accessed 18 May 2019] Available from: http://www.scielo.org.pe/pdf/hm/v14n4/a06v14n4.pdf
2. 2016. [accessed 18 May 2019] Available from: https://www.youtube.com/watch?v=-crBF-tRLGE

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA PARA DM2

Una prueba muy usada para la realización de Tamizaje en la DM2 se conoce como “FINDRISK”ésta prueba se basa en un cuestionario de 8 preguntas que analiza los siguientes aspectos: edad, peso, perímetro de la cintura, actividad física, hábitos alimenticios inadecuados, medicación, episodios previos de hiperglucemia y predisposición genética (1), sigue el link en caso de que tu curiosidad se haya despertado: https://www.fundaciondiabetes.org/prevencion/findrisk 

                                                      Los resultados arrojados, pueden ser:

Resultados-“FINDRISC” (1)

A más de esto se pueden realizar, pruebas confirmatorias basadas en el estudio de:

•  Hemoglobina glucosilada
• Glucosa plasmática en ayunas 
• Glucosa plasmática aleatoria.
• Prueba de tolerancia oral a la glucosa (2).

La siguiente tabla le ayudará a comprender qué significan los valores de su prueba

Valores Diagnóticos (2)

BIBLIOGRAFÍA

1. Diabetes F. Resultados Test Findrisk 2017. Fundaciondiabetes.org. 2018. [accessed 12 May 2019] Available from: https://www.fundaciondiabetes.org/general/articulo/215/resultados-test-findrisk-2017
2. Information H. Pruebas y diagnóstico de la diabetes | NIDDK. National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases. 2016. [accessed 12 May 2019] Available from: https://www.niddk.nih.gov/health-information/informacion-de-la-salud/diabetes/informacion-general/pruebas-diagnostico

ALTERACIÓN EPIGENÉTICA

ALTERACIÓN EPIGENÉTICA DE LA DIABETES MELLITUS TIPO 2

Metilación del ADN

Recientemente se ha demostrado el origen fetal de la DMT2 en el adulto y su relación con los receptores nucleares (PPAR). Existen evidencias que sugieren que la obesidad o una dieta inapropiada durante el embarazo generan efectos adversos en la salud de la descendencia a largo plazo. Los PPARγ, es un regulador de los genes mitocondriales y su expresión disminuida está relacionada con fallas en la fosforilación oxidativa en el tejido del músculo esquelético; también se ha relacionado con fallas en la secreción de insulina, esto se presenta cuando el nivel de metilación de ADN se incrementa en una región promotora de PPARGC1A en las isletas pancreáticas de pacientes con DM2 (1).

Etapas del desarrollo en las que se pueden presentar alteraciones epigenéticas (2)

Epigenética (3)

                         

                                                

                     ¿Qué es la epigenética?(4)

Bibliografía

1. Valladares Salgado A, Suárez Sánchez F, Burguete García A, Cruz M. Epigenética de la obesidad infantil y de la diabetes. 2014.[accessed 4 May 2019] Available from: https://www.redalyc.org/html/4577/457745485015/
2. 2015. [accessed 4 May 2019] Available from: https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgeNEJwZnvezqc1I2IBDdgbQ8MW3MnIuqfasZL1g-_HL_jS7NLwCB8hsPkg0m7ueFMsK-cZlefx3Z0J_Wyxy6z59ynTPVOC5GBzOWhCHHwyvw0CfgPHmoyvFMiuIdf7BmADKHp91KtzBpw/s1600/Captura+de+pantalla+(16).png
3. Epigenética. [accessed 4 May 2019] Available from: http://episcience.emiweb.es/medias/files/animation-final-ever.gif
4. YouTube.¿Qué es la epigenética?. 2018. [accessed 4 May 2019] Available from: https://www.youtube.com/watch?v=4VqBqLG7PxM