PRUEBA DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA

PRUEBA DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA DE DMT2

T:Análisis de asociación genética entre el SNP RS914458 del gen proteína tirosina fosfatasa no receptor tipo 1 (ptpn1) y diabetes tipo 2 en población peruana
O:Evaluar la posible asociación entre el SNP rs914458 (C>G) del gen PTPN1con la DM2 en una población de la zona urbana de Lima – Perú.
M:
200µL de linfocitos de sangre periférica, de los cuales 50µL de DNA que fue almacenado a -20º C.
AN:ADN genómico humano extraído mediante el kit de extracción PureLink (Invitrogen).
G:SNP (polimorfismo de un solo nucleótido) rs914458 del gen PTPN1,este polimorfismo rs914458 (C>G) se encuentra localizado a 10 kb downstream del gen PTPN1 que codifica una proteína tirosina fosfatasa 1B (PTP1B).
PCR: Las mezclas se realizaron en un volumen de 20 µL, con buffer PCR 1X, 200 µmol de dNTP, 1.5 mM de MgCl2, 0.25 U AmpliTaq Gold, 40 ng de DNA genómico y 0.5 µL de cada primer. 
Las condiciones de amplificación para el SNP fueron: 95ºC por 2 min, 30 ciclos de 95ºC por 30 s, 64ºC por 30 s y 72ºC por 10 s, y finalmente 72ºC por 10 min.
Los fragmentos amplificados fueron purificados con el kit High Pure PCR cleanup micro.
V:La visualización de cada fragmento se realizó por electroforesis en gel de agarosa al 1.5%. (1)

PCR BUFFER (2)

BIBLIOGRAFÍA:

1. Paredes Anaya M, Solís Villanueva J, Manrique Hurtado H, Calderón Ticona J, Torres Gonzales D, Padilla Rojas C et al. Análisis de asociación genética entre el SNP RS914458 del gen proteína tirosina fosfatasa no receptor tipo 1 (ptpn1) y diabetes tipo 2 en población peruana. 2014;. [accessed 18 May 2019] Available from: http://www.scielo.org.pe/pdf/hm/v14n4/a06v14n4.pdf
2. 2016. [accessed 18 May 2019] Available from: https://www.youtube.com/watch?v=-crBF-tRLGE